MILE米乐提供的稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）是一种用于评估抗菌剂抑制微生物生长能力的实验技术。此方法分为微量稀释法和常量肉汤稀释法两种。在众多技术中，琼脂稀释法因其操作简单、成本低且适合高通量筛选，尤为适合自动化操作及精确控制药物浓度。相对而言，肉汤稀释法则以其直观和易操作性适用于实验室规模的测试，并允许根据实验需求灵活调整药物浓度和培养基的体积。

琼脂稀释法

MILE米乐的琼脂稀释法的基本原理是将不同浓度的抑菌剂溶解在琼脂培养基中，然后点种细菌，通过观察细菌的生长情况来确定抗（抑）菌产品的最低有效抑制浓度，也就是最小抑菌浓度（MIC）。此方法特别适用于不溶性抗（抑）菌产品。

操作步骤

(1) 抗（抑）菌溶液的配制：采用无菌操作取5ml或5g样品（固体样品需研磨），将其放入45ml灭菌的磷酸缓冲液中，充分震荡以获得10%的均匀分散溶液。

(2) 制备含抗菌剂的培养基：将10%的抗（抑）菌溶液用PBS进行两倍系列稀释，制备不同浓度的实验液，并在45℃至50℃的水浴中恒温备用。

(3) 准备双倍浓度琼脂培养基：称取76g MH琼脂培养基，溶于1000ml水中，加热至沸腾以充分溶解，然后在121℃下进行压力蒸汽灭菌15min，最后将其置于45℃至50℃的水浴中备用。

(4) 制备含抗（抑）菌液的培养基：从系列稀释的抗菌液中各取10ml至平皿内，再将同样体积的双倍MH琼脂培养基加入，边加边摇晃至充分混匀，待其凝固后备用。

(5) 移取1μl至2μl的菌悬液（约107cfu/ml）点种于含抗（抑）菌液的平皿中，直至形成直径约5mm至8mm的菌液圈（每个点菌量约为104cfu）。

(6) 同样方法接种不含抗（抑）菌成分的MH琼脂平板，作为阳性对照。

(7) 将接种后的平板放置于35℃培养箱中倒置培养18至24小时，观察结果。

评判标准

在MILE米乐的实验中，若完全抑制菌落生长的最低抗（抑）菌液浓度则为该样品对受试菌的MIC，单一菌落的生长可被忽略。

营养肉汤稀释法

本实验将不同浓度的抑菌剂溶解于营养肉汤培养基中，然后接种细菌，通过观察细菌的生长情况来确定最小抑菌浓度（MIC）。此方法适用于可溶性抑菌产品。

操作步骤

(1) 制备金黄葡萄球菌和大肠杆菌的悬液，依照2112方法操作。

(2) 制备含抗菌剂的培养基：将抗（抑）菌溶液用蒸馏水进行两倍系列稀释，取各稀释度受试液25ml加入25ml的双倍浓度营养肉汤中。

(3) 将0.1ml的菌悬液（约108cfu/ml）接种于含抗（抑）菌剂的营养肉汤的试管中，作为实验组样本。

(4) 同样方法接种不含抗（抑）菌剂的营养肉汤的试管中，作为阳性对照组样本。

(5) 取两支含营养肉汤的试管作为阴性对照组样本。

(6) 将所有样本放置于37℃培养箱中培育48小时，最终观察结果。

评判标准

在MILE米乐的实验中，当阳性对照管中出现细菌生长（混浊），而阴性对照管中无细菌生长（透明），试验用菌悬液的作用浓度为5×10^5cfu/ml至5×10^6cfu/ml时，实验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗（抑）菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。